Human Betacellulin ELISA KIT人β-细胞素ELISA试剂盒

人β细胞素 (BETACELLULIN) 定量分析

酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的Betacellulin浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投诉，请在收到货一个月之内联系我们。

BETACELLULIN简介：

人Betacellulin（BTC）最少由十种蛋白质组成，包括EGF、TGF-α、双调蛋白、HBEGF和其他调节蛋白等, 是EGF细胞因子家族的一个新成员。人BTC基因定位于4号染色体的q13-q21区域，其cDNA全长为1.3kb。成熟人BTC是一种糖蛋白，由80个氨基酸组成，分子量为18kD。BTC序列比较保守，人成熟BTC蛋白与小鼠的同源性达到79%。此外，BTC在机体内分布广泛，它广泛地表达于胰岛、肾小管上皮、心脏、肺、睾丸、卵巢、小肠上皮和肝脏等器官和组织。

BTC的生物学效应涉及到肿瘤转移过程的细胞增殖、侵袭、抗凋亡、微血管形成等环节。研究发现，BTC能促进β细胞的迁移和细胞内肌动蛋白的重塑，表明BTC参考调节β细胞的迁移或运动。BTC在调节胰岛素分泌前体的细胞生长分化中起重要作用，如作用于胎儿胰腺的原始导管细胞和产生胰岛素的胰岛细胞，刺激胎儿胰岛上皮细胞增生等。BTC与EGF受体结合后，可强烈地刺激Balb/c 3T3成纤维细胞、视网膜色素上皮细胞和血管平滑肌细胞的有丝分裂。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中Betacellulin 的浓度。Betacellulin捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的Betacellulin会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人Betacellulin抗体后，抗人Betacellulin抗体与Betacellulin接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在Betacellulin将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，Betacellulin浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中Betacellulin浓度。

人BETACELLULIN定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。

注：血清血浆标本请用1X标准品稀释液稀释后再检测。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准确性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3. 将5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。

4.标准品: 根据标签复溶体积加入1×标准品稀释液使Betacellulin终浓度达到1000pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置15~20分钟后轻轻混匀（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为1000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪；

3.自动洗板机；                     

4.去离子水或双蒸水；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将样品或不同浓度标准品按照100μl/孔加入相应孔中，用封板膜封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清血浆样本，一般5~80倍稀释，如无准确范围，可从20倍开始稀释，如检测超出范围，加大稀释倍数重新检测。请注意记录好样品的稀释倍数。

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育60分钟。   

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。

10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数值和参考曲线