Human TFF3 ELISA KIT三叶因子3ELISA试剂盒

人三叶因子3定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的TFF3浓度使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投诉，请在收到货一个月之内联系我们。

TFF3简介：

三叶因子3，也称为肠三叶因子（ITF），是一种三叶形结构的分泌蛋白，其结构中包含有三叶结构域（这些结构域采用三叶构象，由保守的链内二硫键连接在一起）。TFF3是一种约7kDa的肽，可通过二硫键连接成二聚体，或与肠道粘液蛋白FCGBP和MUC-2等蛋白结合形成的复合物。成熟的人TFF3蛋白与小鼠和大鼠的TFF3蛋白有76%的序列同源性。

TFF3通过呼吸道、胆管和乳腺管、结膜、小肠和大肠以及胃贲门等组织的上皮杯状细胞表达。除了上面的粘液层，分泌后的TFF3蛋白在母乳和血清中也存在。在大部分上皮组织损伤的情况下，TTF3都会上调，TTF3在上皮再生和伤口愈合中也发挥重要作用。此外，TTF3与肿瘤细胞侵袭和转移有关。它促进肿瘤细胞中低氧诱导状态下的VEGF上调，也会促进非肿瘤环境中的血管生成。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TFF3的浓度。TFF3捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TFF3会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入与生物素化的抗人TFF3抗体后，抗人TFF3抗体与TFF3接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。再加入亲和素连接的HRP结合物，生物素与亲和素结合，其它游离成分通过洗涤的过程被除去，最后加入显色剂，若样本中存在TFF3将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TFF3浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中TFF3浓度。

人TFF3定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。

注：人血清或血浆样本请用1X标准品稀释液做稀释后再检测。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准确性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3. 将5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入1×标准品稀释液复溶使TFF3终浓度达到500pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置15~20分钟后轻轻混匀（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为500pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪；

3.自动洗板机；                     

4.去离子水或双蒸水；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟。对于血清样本，稀释范围是30~450，如果没有确定信息，可从40倍开始稀释。唾液样本一般稀释范围是800~7000，如果没有确定信息，可从3000倍开始稀释。尿液样本一般稀释范围是100~3000，如果没有确定信息，可从400倍开始稀释。如果样本浓度过高，超过检测范围，请加大稀释倍数后检测。请注意记录好样品的稀释倍数。

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素连接抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育60分钟。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育20分钟。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数值和参考曲线