| 特点 | 贴壁生长 呈鹅卵石细胞样,不规则细胞样 基础培养基500ml;生长添加剂5ml;胎牛血清25ml;双抗5ml |
|---|---|
| 特性 | 仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 | 优势 | 提供免疫荧光鉴定报告 |
| 特点 | 贴壁生长 呈鹅卵石细胞样,不规则细胞样 基础培养基500ml;生长添加剂5ml;胎牛血清25ml;双抗5ml |
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| 特性 | 仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 | 优势 | 提供免疫荧光鉴定报告 |
原代细胞收货注意事项:
贴壁细胞经过快递运输颠簸会出现漂浮脱落等情况: 收到先放培养箱静置稳定。如有脱落需收集处理,处理细节请查阅以下信息,原瓶内为完全培养基,可以收集使用。
收到细胞后请把细胞图片状态发我们, 根据图片可以给出接下来的处理建议(传代或者换液),首次建议一比二传代至2个T25。
贴壁细胞传代步骤:
准备工作:胰酶和完全培养基(需要提前37度复温)、PBS(常温)避免细胞遇冷受刺激
(1) 吸出原培养液
(2) 加入2ml左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃
(3) 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。
(4) 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间,消化约2-3min,显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大,显微镜下看细胞呈单个游离状态,侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化,可以轻拍培养瓶侧身。(消化时主要看消化状态,如果没有变圆,侧立时不能滑落时,可以适当延长消化时间,每30s观察一次细胞)
(5) 加入3ml含10%血清的培养基终止消化,轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打(不要太用力)使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。
(6) 收集细胞悬液离心,1000rpm/min(约250g) 5分钟,离心完吸出上清丢弃。
(7) 加入新鲜完全培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补足完全培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。
(8) 检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。
贴壁细胞传代的方法,特别注意的是第4步消化过程,消化至到细胞完全变圆以后侧立培养瓶细胞可以出现滑落时再终止消化。消化到这样的一个状态,后续轻轻稍微吹一下即可很好的分散细胞。
后续处理建议:传代后2-3天换液一次即可,(如细胞第二天全部贴壁培养基颜色变黄,可以换液,)无需每天换液(换液太勤可能会损失细胞影响细胞状态)换液时候如果没有特殊情况也可以不用PBS清洗。
原代悬浮细胞接收注意事项:
1. 悬浮细胞经过快递运输,会出现细胞皱缩和死细胞碎片等情况,收到时先放培养箱静置4小时以上,2.将瓶内全部培养基吸至离心管内离心收集,3.使用5-6ml新鲜培养基重悬细胞沉淀后接种T25培养瓶中继续培养。
悬浮细胞传代:
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。 方法一:将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加新鲜培养液后重悬混匀按1:2的比例分到 新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力。 方法二:1) 半换液处理,竖着培养瓶静置 10-20min 左右,肉眼可见大部分细胞沉在底部; 2) 轻轻吸掉 3ml 左右培养基,将剩余细胞悬起混匀; 3) 将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中,一般这样传代 3 次左右可以离心传代一次。 注意:使用试剂需要提前37度复温,避免细胞遇冷受刺激皱缩。
后续处理建议:悬浮细胞状态在无碎片无黑点的情况下无需换液,观察培养基偏黄及时进行补液2ml左右,当细胞出现分泌物可以使用半换液法处理,参考图片
离心管方式收货:收到离心管酒精消毒放入培养稳定2-4H后进行1000rpm离心5min。去除上清后保留细胞沉淀用新鲜培养基重悬混匀转移至培养瓶进行培养,次日观察细胞的状态及密度.
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