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胎牛血清分类

根据胎牛血清的处理工艺和用途,市场上常见的胎牛血清有:

•标准胎牛血清

未经过任何物理或化学方法处理,也没有经过特殊筛选的胎牛血清。

•透析型胎牛血清(Dialyzed FBS)

通过透析手段去除小分子物质后的特种血清,通常使用截留分子量为10 kDa的透析膜,大幅减少(去除率 >90%)氨基酸(如谷氨酰胺、精氨酸等),糖类(主要是葡萄糖),代谢产物(如尿素、肌酐),电解质/盐类(如钠、钾离子,但取决于透析液配方),某些激素与信号分子(如甲状腺素、某些类固醇)。

葡萄糖是最常用的透析指标,透析后浓度通常要求低于5 mg/dL,这种血清主要用于那些需要严格限制背景营养干扰的实验。

•碳吸附胎牛血清(Charcoal Stripped FBS)

也常被称为“活性炭/右旋糖酐处理血清”。如果说透析血清是为了去除“小分子”,那么碳吸附血清的主要目的就是去除“亲脂性分子”,特别是类固醇激素。

处理工艺是将活性炭与右旋糖酐(Dextran)混合,加入血清中。右旋糖酐的作用是包裹活性炭,防止其过度吸附大分子蛋白质,并减少对血清成分的粗暴损伤。

碳吸附处理具有高度的选择性,类固醇激素可减少90%以上,脂溶性维生素与代谢产物、一些亲脂性的生长因子也会大幅减少。

碳吸附胎牛血清主要用于内分泌和激素信号转导研究实验,常见的指标:

雌二醇:通常要求浓度低于10 pg/mL(普通血清通常在 30-60 pg/mL 以上)。

睾酮:通常要求低于0.1 ng/mL。

孕酮:要求显著降低,通常在0.2 ng/mL

•无外泌体胎牛血清(Exosome-Depleted FBS)

最常用的方法是超速离心法或切向流过滤来去除血清中的外泌体,通常要求去除95% - 99%以上的内源性牛外泌体。通过Western Blot检测,CD63/CD81等标志物这些典型外泌体蛋白条带应基本消失。HAKATA无外泌体胎牛血清是经过两次抽提,一次抽提试剂盒 抽提, 一次超高离心 ,所以提出率达99%。而且血清是巴西顶级血清,基本可以适应任何细胞。

•低脂胎牛血清(Low Lipid FBS)

这类血清来源一般是通过前期源头筛选或后期技术处理2种方法,市场上的低

脂胎牛血清大部分是实验室处理的。利用活性炭吸附亲脂性分子,虽然它主要用于去激素,但由于类固醇和许多脂类(如胆固醇、脂肪酸)具有相似的疏水结构,处理后脂质水平会大幅下降,也会使用更专业的有机溶剂或特异性层析柱去除特定的脂蛋白(LDL、VLDL等),这种方式对蛋白质损伤较大,仅用于极高端的定制产品。低脂胎牛血清总胆固醇含量通常要求从普通血清的30-50mg/dL降低至10mg/dL以下,主要用于代谢病和细胞信号转导研究。

•低IgG胎牛血清(IgG-Low/Reduced FBS)

是通过前期筛选或特定的生物化学手段,大幅度去除血清中内源性牛免疫球蛋白

(主要是IgG)后的特种血清。它在抗体生产、免疫检测及病毒学研究中具有不可替代的作用。IgG浓度通常要求低至< 5 μg/mL。

现在很多血清品牌,通过严格的上游筛选和检测,能很好的控制FBS中的IgG浓度。

•四环素阴性胎牛血清(Tetracycline-Free FBS)

是一类经过专门筛选或处理,确保其中四环素、强力霉素(Doxycycline)及其衍生物残留量极低的特种血清。是四环素调控基因表达系统的实验室必不可少的产品。

该血清的生产,目前主流的做法是严苛的批次筛选,选取不使用抗生素饲喂的牛群,生产后使用高灵敏度的ELISA 试剂盒或液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)技术对每一批次进行定量检测,通常要求四环素残留量检测不到,一般需低于1 ng/mL(甚至更低)。

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•热灭活(Heat Inactivation FBS)

热灭活的经典操作是将血清置于56°C 水浴中处理 30 分钟,其主要目的是灭活补体:补体系统具有溶细胞活性,在培养原代细胞(如DRG神经元)、免疫细胞或进行病毒/抗体相关实验时,补体可能会攻击靶细胞或干扰实验结果。

热灭活胎牛血清主要用于需要避免补体系统干扰的特定细胞培养和免疫学实验场景。过去国内市场上主要是新生牛血清,补体浓度较高,所以需要热灭活,现在主要是胎牛血清,正常的细胞培养实验,不需要热灭活处理了。

注意:假如需要对血清进行热灭活,应该让血清在水浴中升温,维持56°C 30分钟,而不是在水浴锅温度达到56℃后再放进去。

•辐照型胎牛血清(Gamma Irradiated FBS)

是通过高能射线(通常是钴-6 0)照射处理后的血清。它的核心目的只有一个:在不打开包装的前提下,实现极高水平的生物安全安全性。标准剂量通常在25-45kGy之间。这个剂量经过精确计算,足以破坏微生物的核酸,使其失去复制能力。

•其它

市场上还有一些血清种类,如胚胎干细胞专用血清、肿瘤细胞专用血清、补铁型血清等,都是厂家根据自己的研发和质检,来定义的产品名称。

特别注意的是,大部分经过实验室处理的胎牛血清,会损失一部分营养物质,导致细胞培养效果变差。

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